Un kit de RT-qPCR en tiempo real, sensible y altamente específico, diseñado para la amplificación rápida de ARN en un solo paso y compatible con un amplio rango de cantidades de ARN de entrada.
Alta tolerancia a inhibidores en extractos complejos
Miniaturización escalable
Alta sensibilidad para muestras con baja cantidad de ARN
Formato: Kit de RT-qPCR en un solo paso
Permite una cuantificación eficiente, sensible y lineal en un amplio rango de concentraciones del target, con cantidades de ARN de entrada de hasta 0,1 pg.
Utiliza un mecanismo de hot-start basado en aptámeros que reduce la amplificación inespecífica en ciclos tardíos, manteniendo una señal del target clara y definida incluso después de 45 ciclos.
Mantiene una alta precisión enzimática y eficiencia de reacción incluso al trabajar con muestras biológicas complejas o con residuos derivados del proceso de extracción.
DATOS DE RENDIMIENTO
Alta eficiencia de amplificación (100 %) y rendimiento reproducible en un amplio rango de concentraciones de ADN de entrada (0,1–1000 pg)
A.
B.
C.
Figura 1. Evaluación del kit One-Step RT-qPCR: eficiencia de amplificación y reproducibilidad. Se llevó a cabo una RT-qPCR dirigida a Listeria spp. utilizando el kit One-Step RT-qPCR con cinco concentraciones de ARN de enrada (0,1–1000 pg; 3 réplicas técnicas por concentración). Las reacciones se llevaron a cabo según el protocolo recomendado. (A) Los gráficos de amplificación muestran una amplificación robusta en todo el rango de concentraciones de ADN de partida, con una variación mínima entre las réplicas técnicas, lo que demuestra la alta sensibilidad y reproducibilidad del ensayo. (B) Valores medios de Ct, desviaciones estándar de Ct (Ct SD), fluorescencia final (RFU) y desviaciones estándar de RFU (RFU SD) para cada concentración de entrada. La baja variabilidad de Ct y las señales de fluorescencia consistentes en toda la serie de diluciones indican una alta precisión del ensayo. (C) La curva de calibración generada a partir de los valores medios de Ct demuestra linealidad en cinco órdenes de magnitud (R² = 0,999), con una eficiencia de PCR calculada del 100,8 %, lo que respalda una detección cuantitativa precisa en todo el rango de concentraciones de entrada analizado.
El kit permite una amplificación consistente y de alto rendimiento de los principales virus de la acuicultura, lo que garantiza una detección precisa y confiable.
A.
B.
Figura 2. Evaluación del rendimiento del kit One Step RT-qPCR para la detección de los principales patógenos virales de los salmónidos. El kit One Step RT-qPCR demuestra una amplificación sólida de los principales virus de los salmónidos, incluidos el virus de la anemia infecciosa del salmón (ISAV), el ortoreovirus piscícola (PRV) y el virus de la necrosis pancreática infecciosa (IPNV) con cargas virales medias (IPNV++) y altas (IPNV+++). (A) Las curvas de amplificación representativas muestran los perfiles sigmoidales esperados para todos los objetivos virales, lo que confirma una detección fiable en los distintos objetivos virales. (B) La tabla resumen muestra valores medios de Ct que oscilan entre 15,57 y 31,41, con bajas desviaciones estándar de Ct (Ct SD).
Consigue resultados más rápidos y con mayor sensibilidad. El kit One Step RT-qPCR detecta de forma sistemática los objetivos virales entre 5,6 y 6,8 ciclos antes que la competencia, lo que garantiza una fiabilidad y precisión sin igual.
Gráfico de amplificación del kit One Step RT-qPCR
Mezcla maestra KAPA PROBE FAST One-Step qRT-PCR
Figura 4. Comparación del rendimiento del kit One Step RT-qPCR y del KAPA PROBE FAST One-Step para la detección del ortoreovirus pisciano-1 (PRV-1) en diferentes cargas virales. En cuatro cargas virales relativas (alta ++++, medio-alta +++, medio-baja ++ y baja +), el kit One Step RT-qPCR (arriba) demostró un rendimiento mejorado, detectando las dianas virales entre 5,6 y 6,8 ciclos antes (Ct) que el KAPA PROBE FAST One-Step (abajo) en todos los rangos de concentración, al tiempo que mantenía señales de fluorescencia intensas (ΔRn, normalizadas con ROX y corregidas con respecto a la línea de base).
APLICACIONES
Para flujos de trabajo centrados en la detección o cuantificación de objetivos de ARN mediante RT-PCR en tiempo real en un formato de un solo paso.
APLICACIONES
Para flujos de trabajo de investigación centrados en la detección de moléculas de ARN asociadas a patógenos animales.
Para flujos de trabajo de seguimiento molecular en los que se realiza un seguimiento de las moléculas de ARN objetivo en muestras de investigación o programas de vigilancia.
Para flujos de trabajo de investigación relacionados con brotes epidémicos en los que la RT-qPCR puede ayudar a evaluar marcadores de ARN en un ensayo validado.
APLICACIONES
Para flujos de trabajo centrados en el seguimiento de marcadores de ARN asociados a microorganismos relevantes para la investigación en materia de seguridad alimentaria.
Para la evaluación de los patrones de contaminación o de las posibles fuentes, siempre que el ensayo haya sido validado para el contexto previsto.
Para programas de control medioambiental o de instalaciones en los que los marcadores basados en ARN forman parte de la estrategia de análisis molecular.
